用于組織透明化樣品的成像室

透明室

透明室是在使用顯微鏡觀察組織透明化樣品時(shí)使用的觀察容器。透明室由10套硅橡膠板、蓋玻片和載玻片組成，它能讓您輕松地觀察組織透明化后的樣品。其中有五種厚度的硅橡膠可供作墊片，分別為0.3 mm、0.5 mm、1.0 mm、2.0 mm和3.0 mm，可根據(jù)您的樣品選擇所需尺寸。

硅橡膠板的兩側(cè)貼有保護(hù)膜，可在使用時(shí)剝離，從而使載玻片與蓋玻片緊密接觸。

◆透明化工序（使用SeeDB時(shí)）

1. 在4°C下用4％多聚甲醛/ PBS固定小鼠大腦，過夜。

2. 用PBS清洗3次樣品（各10 min）。

3. 將樣品放入裝有20 mL SeeDB:20 w/v% Fructose Solution的50 mL錐形管中。在室溫下，用旋轉(zhuǎn)器旋轉(zhuǎn)試管4~8 h（月4 rpm）。易損的樣品

3. 和切片可使用蹺蹺板振蕩搖床。（約17 rpm）。

4. 將樣品轉(zhuǎn)移至裝有SeeDB：40 w/v% Fructose Solution的50 mL錐形管中，室溫下旋轉(zhuǎn)4~8 h。

5. 將樣品轉(zhuǎn)移至裝有SeeDB：60 w/v% Fructose Solution的50 mL錐形管中，室溫下旋轉(zhuǎn)4~8 h。

6. 將樣品轉(zhuǎn)移至裝有SeeDB：80 w/v% Fructose Solution的50 mL錐形管中，室溫下旋轉(zhuǎn)12 h。

7. 將樣品轉(zhuǎn)移至裝有SeeDB：100 w/v% Fructose Solution的50 mL錐形管中，室溫下旋轉(zhuǎn)12 h。

8. 將樣品轉(zhuǎn)移至裝有SeeDB的50 mL錐形管中，室溫下旋轉(zhuǎn)24 h。

圖1. 使用SeeDB的生物體樣品的透明化

從左至右分別為使用SeeDB透明化處理的小鼠胎兒（胎兒12天），新生小鼠（生后3天）的全腦，成年小鼠大腦切片（8周齡，厚度2 mm）的案例。

◆安裝方法

1. 使用與樣品尺寸相匹配的透明室

2. 使用SeeDB時(shí)，請(qǐng)使用SeeDB液安裝樣品。

*若樣品較小，觀察時(shí)會(huì)移動(dòng)的話可使用瓊脂糖凝膠等固定樣品。

◆觀察

1. 使用激光共聚焦顯微鏡或雙光子激發(fā)顯微鏡觀察SeeDB處理的大腦樣品。

*使用SeeDB透明化處理的樣品的折射率較高，為1.49。因此雖然適用于甘油浸沒透鏡，油浸透鏡以及透明化用透鏡，但是水浸透鏡的使用深度只達(dá)約2 mm。浸泡液請(qǐng)使用

*各廠商推薦的浸泡液。請(qǐng)不要使用SeeDB液作為浸泡液。使用空氣物鏡（折射率1.0）或水浸物鏡（折射率1.33）獲得圖像時(shí)，深度的數(shù)值需進(jìn)行校正。

*（校正公式請(qǐng)參閱參考文獻(xiàn)）。

◆觀察實(shí)例

圖2. 使用雙光子激發(fā)顯微鏡獲得的Thy1-YFP-H 小鼠（10周齡）大腦熒光圖像

圖3. 使用共焦距顯微鏡獲得的Thy1-YFP-H 小鼠（10周齡）大腦熒光圖像